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什么是文庫構建？

基于NGS測序的諸多優點，故此技術在全球測序市場上占有著絕對的優勢位置，而新一代測序（NGS）文庫制備是一體化測序流程中的一個關鍵因素，那么什么是文庫構建呢？讓我們一起來看看吧！基因文庫是儲存了某種生物的DNA片段的受體菌的集合體。文庫分為儲存全部DNA片段和部分DNA片段，前者叫基因組文庫，后者包括cDNA文庫。文庫構建的基礎是將目標RNA或DNA制備成可以和測序儀器兼容的形式。從組織或者細胞中將DNA或RNA提取出來，并通過機械破碎或者是酶切法對其進行片段化。如果前面提取...

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不同動物細胞或組織的蛋白質抽提步驟是怎樣的？

你知道不同動物細胞或組織的蛋白質抽提步驟是怎樣的嗎？讓我們一起來看看吧！一、培養的貼壁動物細胞的蛋白質抽提步驟1.從貼壁細胞培養瓶中小心傾去培養液。2.預冷的PBS清洗貼壁的細胞2次，小心傾去PBS。3.配置含抑制劑的蛋白質抽提試劑（1ml抽提試劑中加入5μl蛋白酶抑制劑混合液，5μlPMSF和5μl磷酸酶混合液）。4.細胞瓶中加入預冷的含抑制劑的蛋白質抽提試劑（107個細胞中加入1ml抽提試劑；5×106個細胞中加入0.5ml抽提試劑），輕輕搖動5分鐘。5.用一預冷的橡膠和...

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質粒構建實驗影響因素有哪些？

質粒構建是指選定的目的外源基因（DNA）先要經過PCR擴增。隨后用限制性內切酶分別切割載體和外源DNA片段，再使用DNA連接酶將切割后的載體與DNA片段連接，轉入宿主細胞。最后經過篩選鑒定出正確的重組克隆質粒，實現目的基因在宿主細胞內的正確表達。那么質粒構建實驗影響因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、載體的選擇在選擇克隆載體時應注意以下幾點：①具有自主復制能力，拷貝數高；②攜帶易于篩選的選擇標記；③含有多種限制酶的單一識別序列，以供外源基因插入；④載體應盡可能小（＜15kb...

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影響熒光原位雜交實驗的因素有哪些？

熒光原位雜交是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。那么影響熒光原位雜交實驗的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、固定液的選擇及固定時間①石蠟組織建議用10%中性緩沖福爾馬林固定12～48h，其它固定液對實驗結果可能產生一定的影響。②組織標本離體后應盡快固定，較大標本切開固定。如樣本固定不及時，熒光信號會減弱。（尤其環境溫度較高時更應及時固定）③固定液體積應不少于標本體積的10倍，否則固定不...

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流式細胞周期檢測的常見問題有哪些？

你知道流式細胞周期檢測的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、樣本制備注意事項1.根據不同的檢測細胞調整合適的溫度、濕度、酸堿度等培養環境，注意一定要無菌的環境培養。2.培養細胞時，以對數期處理為宜，避免細胞量過少導致收集細胞量不足或者細胞量過多導致細胞開始大量死亡造成的實驗誤差。3.流式檢測細胞周期上機檢測所需收集細胞量較多，收集細胞時盡量多收集一些4.流式檢測對細胞離心，重懸次數較多，注意動作輕緩，避免過多地損傷、弄破細胞。5.本實驗對細胞離心，重懸次數較多，注意動作...

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